细胞和无细胞线粒体DNA复制数从人类血液和尿液样本的绝对量化使用实时定量PCR
Eliane Caseiro Soares de Menezes1, Afshan Navid Malik2
1Diabetes and Obesity Theme, School of Cardiovascular Medicine and Sciences, Faculty of Life Sciences and Medicine, School of Life Course Science, King's College London, London, UK.
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
|November 15, 2024
概括
这项研究介绍了测量血液和尿液中线粒体DNA拷贝数 (mtDNA-CN) 的标准化协议. 这些方法使得在代谢疾病中可靠地评估线粒体功能障碍的生物标志物.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 遗传学 遗传学 是一个
背景情况:
- 线粒体DNA复制数 (mtDNA-CN) 作为一种关键的生物标志物,用于线粒体功能障碍在代谢疾病.
- 在临床研究和诊断中,精确测量体液中的mtDNA-CN是必不可少的.
- 现有的协议可能缺乏标准化,阻碍了研究之间的可比性.
研究的目的:
- 在人类外周血液和尿液中建立强大的标准化协议来量化细胞和无细胞mtDNA-CN.
- 为DNA提取,量化和数据分析提供全面指南.
- 为了促进研究应用的mtDNA-CN的高通量测量.
主要方法:
- 血分为PBMCs,血和血清,尿液分为超和颗粒的详细协议.
- 来自各种生物分量的DNA制备.
- 量化PCR (qPCR) 用于使用参考标准进行相对和绝对mtDNA-CN量化.
- 数据分析和样本大小计算的统计方法.
主要成果:
- 在血液和尿液中测量细胞和无细胞mtDNA-CN的验证协议.
- 已建立的 mtDNA-CN的绝对和相对量化方法.
- 已证明适用于高通量分析和适应其他样本类型的适应性.
结论:
- 提出的协议提供了一个标准化和可靠的方法来测量人体体液中的mtDNA-CN.
- 这些方法将有助于准确评估线粒体功能障碍生物标志物.
- 该协议的适应性支持在各种研究环境中更广泛的应用.
