通过SWATH LC-MS/MS分析准确和一致量化宿主细胞蛋白质的工作流程,以支持过程开发

科学领域:

• 生物制药学分析分析
• 质谱测量质量谱测量
• 蛋白质量化量化的蛋白质.

背景情况:

• 剩余宿主细胞蛋白 (HCP) 可以影响药物产品的质量,稳定性,有效性和安全性.
• 准确量化低水平 (≥1ppm) 的HCP对于生物制药开发至关重要.
• 现有的方法,如数据依赖获取 (DDA) 和有针对性的方法,对HCP分析有局限性.

研究的目的:

• 提高SWATH MS/MS基方法的准确性和可靠性,以量化残留宿主细胞蛋白 (HCP).
• 开发一种可靠的方法,用于一致的HCP量化,克服与参考蛋白质选择相关的偏见.
• 通过改进的HCP分析来支持生物制药工艺开发.

主要方法:

• 使用了所有理论碎片离子光谱 (SWATH) 的数据独立序列窗口获取MS/MS.
• 基于排名值的优化参考蛋白质选择,以最大限度地减少定量偏差.
• 在消化过程中添加了脱氧化 (SDC),以改善蛋白质检测和定量一致性.
• 使用标准加法与SWATH量化相结合.
• 使用向MRM-MS/MS和ELISA验证的结果.
• 应用了一个自动化的 Spectronaut 数据分析工作流.

主要成果:

• 在基于SWATH的HCP量化中,相对于入的参考蛋白质,实现了更高的准确性.
• 通过添加SDC,证明了蛋白质检测和量化一致性的改善.
• 在使用SWATH与标准加法测量HCP水平方面展示了良好的准确性和可重复性.
• 通过针对性MRM-MS/MS和ELISA的验证证实了该方法的可靠性.
• 通过使用自动化工作流程,成功生成了各种过程中池的定量HCP结果.
• 能够通过高吞吐量和一致性测量特定的HCP,如Peroxiredoxin-1.

结论:

• 增强的SWATH MS/MS方法提供了准确和可重复的剩余医疗保健人员量化.
• 优化的参考蛋白选择和SDC添加显著提高量化可靠性.
• 自动化工作流程促进了高效的HCP分析,支持生物制药工艺开发.
• 这种方法对于通过控制HCP水平来确保药品质量,安全性和有效性是有价值的.