使用CRISPR-Cas13a进行现场部署的猪流行性腹病毒诊断

科学领域:

• 兽医病毒学 兽医病毒学
• 分子诊断学 分子诊断学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 猪流行性腹病毒 (PEDV) 在养猪业造成重大经济损失.
• 快速准确的检测方法对于控制PEDV疫情至关重要.
• 现有的诊断技术可能需要专门的设备或更长的周转时间.

研究的目的:

• 开发一种用于PEDV检测的新,快速和敏感的诊断方法.
• 整合复合酶聚合酶放大 (RPA) 与CRISPR-Cas13a系统用于PEDV诊断.
• 从敏感度,特异性和对临床样本的适用性来评估开发的试验的性能.

主要方法:

• 开发一种针对PEDV的重组酶聚合酶放大 (RPA) 试验.
• 使用CRISPR-Cas13a系统进行信号放大和检测目标识别.
• 使用合成PEDVDNA标准和临床猪样本验证测试.
• 与反转录定量聚合酶连锁反应 (RT-qPCR) 的测试性能进行比较.

主要成果:

• 基于RPA的CRISPR-Cas13a试验成功地在37°C下在40分钟内检测到PEDVDNA标准的低至10副本/μL.
• 该试验显示高特异性,使PEDV与其他相关病原体区分开来.
• 当应用于临床样本时,观察到与RT-qPCR可比的性能.
• 通过侧流条或光实现了视觉检测,从而实现了现场部署.

结论:

• 开发的基于RPA的CRISPR-Cas13a方法为PEDV检测提供了一种可靠,敏感和特定的方法.
• 这种试验适用于在特有地区快速,可在现场部署的诊断.
• 该方法有可能用于检测其他病毒和在食品安全检查中的应用.