为瘤工程3D模型量身定制代谢活动测定

科学领域:

• 生物医学工程 生物医学工程
• 细胞生物学 细胞生物学
• 药物发现 药物发现 药物发现

背景情况:

• 在3D水凝模型中监测细胞行为对于药物开发和理解治疗反应至关重要.
• 基于Resazurin的测定 (PrestoBlue,AlamarBlue) 对于代谢活动是常见的,但对于3D水凝缺乏定义的协议.
• 试验性能受细胞类型,培养条件和测量灵敏度的影响.

研究的目的:

• 评估PrestoBlue和AlamarBlue测定在基于水凝的3D胰腺癌模型中的性能.
• 在3D培养中确定这些代谢试验的最佳试剂度和化时间.
• 将代谢测试与直接细胞计数 (CyQuant) 进行比较,以评估复杂3D环境中的药物治疗反应.

主要方法:

• 胰腺癌细胞在凝甲基和原水凝中进行培养.
• 评估了 PrestoBlue 和 AlamarBlue 的代谢活性,使用不同的度 (4%, 10%) 和潜伏时间 (45分钟,2小时,4小时) 来评估.
• 多细胞3D培养物 (癌细胞,纤维细胞,PBMCs) 用gemcitabine和nab-paclitaxel治疗,与CyQuant试验相比,反应较好.

主要成果:

• 在单种植中,增加试剂度和化时间增加了光强度.
• 10%的试剂度和2小时的化时间适用于水凝和细胞系.
• 在多细胞培养中,代谢分析检测到药物反应,但与CyQuant相比,高估了细胞生长.

结论:

• 优化的条件 (10%试剂,2小时化) 允许在癌细胞单一培养的3D水凝模型中有效地使用PrestoBlue和AlamarBlue.
• 对于多细胞3D培养,代谢测试应与直接细胞活力测试 (如CyQuant) 补充,以准确评估药物效应.
• 在复杂的3D癌症模型中,建议采用组合方法可靠评估细胞活力和生长.