使用基于mTurquoise2的平台开发ATP,cAMP,酸盐和葡萄糖的光寿命生物传感器
Chongxia Zhong1, Satoshi Arai2, Yasushi Okada3
1WPI Nano Life Science Institute, Kanazawa University, Kakuma-machi, Kanazawa 920-1192, Japan; Laboratory for Cell Polarity Regulation, RIKEN Center for Biosystems Dynamics Research (BDR), Suita, Osaka 565-0874, Japan.
Cell reports methods
|November 19, 2024
概括
研究人员开发了新的基于单个光蛋白 (FP) 的FLIM生物传感器,用于可视化细胞过程. 这种多功能的mTurquoise2 (mTQ2) 平台简化了查,并使双重成像能够改善定量细胞内分析.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 细胞生物学 细胞生物学
- 显微镜的使用方法
背景情况:
- 基于单光蛋白 (FP) 的光终身成像显微镜 (FLIM) 生物传感器提供了细胞内过程的定量可视化.
- 目前的发展受到缺乏一般设计框架和复杂的选方法的阻碍.
- 单个检测波长简化了多色成像应用.
研究的目的:
- 通过使用多功能的mTurquoise2 (mTQ2) 骨干来设计新的FLIM生物传感器.
- 为FLIM生物传感器开发建立一个简化选过程.
- 为了证明这些生物传感器对于定量细胞内测量的实用性.
主要方法:
- 通过将传感域插入mTQ2蛋白中,为ATP,cAMP,酸盐和葡萄糖设计了FLIM生物传感器.
- 使用了mTQ2.2的Tyr-145和Phe-146之间的链.
- 采用基于光强度的选用于生物传感器选择.
- 在活细胞中进行双色成像,以监测cAMP和Ca2+动态.
主要成果:
- 开发了FLIM生物传感器,在分析物结合后具有0.5至1.0ns的动态范围.
- 证明了mTQ2 ((1-145) -GT-X-EF-mTQ2 ((146-238)) 骨干作为FLIM生物传感器开发的多功能平台.
- 通过使用双色图像,成功监测活细胞中的同时cAMP和Ca2+动态.
结论:
- mTQ2骨干为开发单FP FLIM生物传感器提供了一个多功能平台.
- 基于强度的查对于开发双功能FLIM和基于强度的成像生物传感器是有效的.
- 这种方法简化了FLIM生物传感器的开发,并使定量细胞分析成为可能.


