在真菌多糖体单氧化酶中的第二球胺催化功能
Allison E Batka1, William C Thomas2, Dan A Tudorica2,3
1Department of Chemistry, University of California, Berkeley, Berkeley, California 94720, United States.
的多糖胺单氧化酶 (PMOs) 使用第二球的histidine进行催化. 这种histidine作为氧介质的键供体,增强纤维素与O2或H2O2的降解.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 酶学 是一种酶学.
- 碳水化合物化学 碳水化合物化学
背景情况:
- 真菌多糖胺单氧化酶 (PMOs) 是一种降解碳水化合物的铜酶.
- 辅助活动9 (AA9) 家族的PMOs在其第二球区域中具有保存的histidine残留物.
- 假设这种histidine在O2依赖反应中参与质子转移.
研究的目的:
- 为了研究第二球西丁 (H157) 在AA9酶MtPMO9E中的作用.
- 确定H157在PMO催化中对质子转移或氧介质稳定至关重要.
主要方法:
- 用局部定向的突变发生法来制造MtPMO9E.的H157A和H157Q变体.
- 酶动力学是使用蜂糖 (Glc6) 作为基质进行的.
- 用O2和H2O2作为辅基质测量了氧化酶和氧化活性.
- 对比了WT和H157Q MtPMO9E的晶体结构.
主要成果:
- H157A和H157Q变种的折叠和氧化酶活性与野生型 (WT) MtPMO9E相似.
- 与WT相比,变种对Glc6的亲和力降低,氧化活性较低.
- H157A表现出最少的活动,而H157Q与H2O2.2保持了一些活动.
- 结构分析显示,变体中的Q157与WT中的H157重叠.
结论:
- 第二个球的histidine (H157) 在MtPMO9E中对质子转移没有必要.
- H157 作为二原子氧中间体的键供体.
- 这种相互作用促进了真菌PMO中O2和H2O2的催化.
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