优化制造临床级遗传操纵天然杀手细胞的程序,用于采用免疫疗法
Haolong Lin1, Shanwei Ye2, Shujia Zhang2
1Department of Hematology, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan, Hubei, China; Immunotherapy Research Center for Hematologic Diseases of Hubei Province, Wuhan, Hubei, China; Key Laboratory of Hematology, Guangxi Medical University, Education Department of Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning, Guangxi, China.
这项研究开发了一种可扩展的方法,用于产生强大的自然杀手 (NK) 细胞用于免疫治疗. 优化的协议使NK细胞的有效基因修饰成为可能,为先进的癌症治疗铺平了道路.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 自然杀手 (NK) 细胞对于采用免疫疗法至关重要,因为它们具有抗瘤潜力.
- 目前在生产足够数量的临床级,转基因NK细胞以用于治疗方面存在局限性.
研究的目的:
- 为大规模生产高细胞毒性NK细胞建立符合良好制造实践 (GMP) 的协议.
- 为优化NK细胞扩张和基因修饰的条件,用于免疫疗法应用.
主要方法:
- 评估了各种细胞培养基 (RPMI 1640,KBM581,SCGM,NK MACS,X-VIVO 15,AIM-V) 与不同的补充剂和料细胞.
- 评估NK细胞活力,扩张,细胞毒性,免疫类型和转录组.
- 使用不同的lentiviral向量和通过核感染优化基因编辑来比较转导效率.
主要成果:
- 用KBM581介质和血清替代剂在2周内扩展超过5000倍,在3周内扩展超过25,000倍.
- KBM581介质与人类AB血清增强了细胞分解活性和关键NK细胞标记物的表达 (NKp30,2B4,PRF1,大酶B,IL2RG).
- 巴包膜晶状病毒实现了强大的NK细胞转导,并在激活后4-6天使用LONZA DN-100程序实现了高效的基因编辑.
结论:
- 为大规模生产高细胞毒性NK细胞开发了一种符合GMP的协议.
- 该协议支持NK细胞的高效基因修饰.
- 这些进展使NK细胞成为普遍免疫疗法应用的有希望的候选人.
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