使用廉价的光酶检测协议,对全球卫生重点箱进行查,以防Plasmodium berghei肝脏阶段寄生虫

科学领域:

• 寄生虫学的寄生虫学
• 药物发现 药物发现 药物发现
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 疟疾仍然是一个全球性的健康问题,随着耐药性日益增加,需要新的治疗方法.
• 针对菌寄生虫的肝脏和血液阶段,对于有效根除疟疾至关重要.
• 目前的肝脏阶段查试验复杂而昂贵,阻碍了药物开发.

研究的目的:

• 适应和验证一个具有成本效益的露西法酶检测协议,用于查Plasmodium肝阶段寄生虫.
• 为了实现针对疟疾寄生虫肝脏阶段的抗疟疾化合物的高通量查 (HTS).
• 促进新型抗疟疾药物候选药物的识别和优化.

主要方法:

• 优化细胞溶解,试剂度和肝细胞密度 (HepG2) 进行光酶试验.
• 使用28种遗留的抗疟疾药物验证了该协议,并选了全球卫生优先盒 (GHPB).
• 使用72小时HepG2试验评估化合物选择性,以减轻Crabtree效应,并使用ROC图表分析屏幕可预测性.

主要成果:

• 通过较低的HepG2细胞密度 (5 x 10^3细胞/井) 达到最佳信号.
• 开发的化酶试验显示出高稳定性 (半衰期>3小时) 和稳定性,使得剂量反应分析只需500个杂虫/井.
• 查GHPB发现了9个对P. berghei肝分裂菌具有选择性活性的命题,其中包括一种具有30.2nM强度的化合物;回顾性分析证实了抗疟疾活性和细胞毒性的优良预测价值.

结论:

• 开发的化酶试验适用于肝阶段抗疟药的HTS,与商业套件相比,其成本降低了近20倍.
• 这种方法显著提高了大规模肝脏阶段抗疟疾查的能力,并加速了击中优化.
• 持续优化已识别的热点预计将产生有前途的新型抗疟疾药物候选者.