来自大肠杆菌中 Bacillus subtilis 的两个基托桑酶信号的比较分泌效率

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 生物技术是生物技术.
• 蛋白质工程是指蛋白质工程.

背景情况:

• 大肠杆菌中复合蛋白的细胞质表达通常会导致诸如蛋白质分解和纳入体形成等问题.
• 大肠杆菌中的细胞外蛋白质分泌可以减轻这些挑战,简化下游加工和提高产量.
• 信号在指导细胞膜内的蛋白质分泌中起着至关重要的作用.

研究的目的:

• 为了比较两个Bacillus subtilis基托桑酶信号在调解大肠杆菌中蛋白质的细胞外分泌中的有效性.
• 为了研究自然发生的突变信号 (mCsn2-SP) 对增强蛋白质分泌的潜力.
• 评估这些信号对异质蛋白质分泌的有用性,例如人类的Cu,Zn-超氧化物脱酶 (hSOD).

主要方法:

• 在pET-11a载体中克隆Bacillus subtilis的CH1胆酶 (CH1CSN) 和CH2胆酶 (CH2CSN) 基因,分别具有Csn1-SP和mCsn2-SP.
• 在不同度 (0.1毫米和1毫米) 和30°C化时间 (1和3天) 的异基β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) 细胞下,对大肠杆菌BL21(DE3) 主体细胞的表达和分泌评价.
• 使用已识别的mCsn2-SP.对hSOD分泌和转移到周等离子体区域的分析.

主要成果:

• 使用mCsn2-SP的CH2CSN,在所有测试条件下,与CH1CSN相比,显示出显著更高的细胞外分泌水平.
• 在0.1毫米IPTG诱导3天后观察到最佳分泌,CH2CSN分泌增加2.37倍.
• mCsn2-SP成功地促进了大肠杆菌中异构的人类Cu,Zn-超氧化物脱酶 (hSOD) 的分泌和周等离子体转移.

结论:

• 自然发生的修改信号,如删除变体mCsn2-SP,可以显著提高异质蛋白质分泌效率在大肠杆菌.
• 来自B. subtilis的mCsn2-SPCH2基托酶为改善细胞外再生蛋白质的产生提供了一个有希望的替代方案.
• 这项研究验证了信号变体的使用,以克服大肠杆菌蛋白质表达系统中常见的挑战.