脑活检的提取方法NMR代谢学:平衡代谢物稳定性和蛋白质沉

科学领域:

• 代谢学 代谢学 代谢学
• 神经科学是一个神经科学.
• 分析化学 分析化学

背景情况:

• 液态核磁共振 (NMR) 代谢学需要在化溶剂中提取极性代谢物.
• 目前的方法往往优先考虑代谢物恢复而不是蛋白质去除,这可能会影响代谢物完整性和稳定性.
• 动物大脑提取物中的残留蛋白质污染是NMR代谢学的一个问题.

研究的目的:

• 为了研究残留蛋白质污染对动物大脑提取物的影响.
• 确定一种可重复的提取方法,优化NMR代谢组的代谢物回收和样本稳定性.

主要方法:

• 评估的乙二/水 (50-100% MeCN),甲醇/水 (50-100% MeOH) 和甲醇/水/ (MeOH/H2O/CHCl3) 进行提取.
• 评估了提取效率,可重复性,残留蛋白质污染和代谢物稳定性,最长可达8小时后制备.
• 使用超过来确认蛋白质沉的有效性.

主要成果:

• 在50%的MeCN和50%的MeOH提取中观察到阿斯巴酸盐和谷氨酸酸盐的化和N-乙阿斯巴酸盐的转化,与剩余蛋白质相关.
• 甲醇/水/ (MeOH/H2O/CHCl3) 提取证明了有效的蛋白质沉.
• MeOH/H2O/CHCl3提取保留了代谢物稳定性,显示出良好的效率和可重复性.

结论:

• 推MeOH/H2O/CHCl3提取用于非向的大脑NMR代谢概况,因为有效的蛋白质去除和可靠的性能.
• 这种方法确保了NMR分析期间的代谢物完整性和样本稳定性.
• 这种方法并不能提高对容易氧化的代谢物,如甲酸盐和谷氨的检测.