在不同电压水平的电解和微注射之间进行比较,以产生具有多个异抗原敲定结果的猪胚胎
Juan Pablo Fernández1,2, Björn Petersen1,3, Petra Hassel1
1Institute of Farm Animal Genetics, Friedrich-Loeffler-Institut, 31535 Neustadt, Germany.
International journal of molecular sciences
|November 27, 2024
概括
猪中用于异种移植的CRISPR/Cas9基因编辑显示出有希望的结果. 在35V的电穿孔提高了编辑效率,但马赛克主义仍然是产生三重敲击胚胎的挑战.
科学领域:
- 异种移植研究 异种移植研究
- 基因编辑技术 基因编辑技术
- 转基因动物生产
背景情况:
- 转基因猪对于异种移植至关重要.
- 传统的生产淘汰猪的方法是耗时的.
- 克里斯普尔/Cas9提供了直接的基因向性细胞,但需要优化.
研究的目的:
- 为了比较用于输送CRISPR/Cas9核糖核酸蛋白 (RNP) 的电穿孔和微注射.
- 为了产生三重淘汰的猪胚胎,向异抗原GGTA1,CMAH和B4GALNT2.
- 评估基因编辑效率,马赛克主义和胚胎存活率.
主要方法:
- 设计了针对GGTA1,CMAH和B4GALNT2基因的RNP复合体.
- 通过电穿孔和微注射将RNP传递给猪肉细胞.
- 分析了基因编辑结果,包括马赛克和双联扰乱频率.
主要成果:
- 电穿孔中的电压增加增加了分子摄入量,但没有影响胚胎细胞形成.
- 在35V的电穿孔导致双基因破坏的最高频率.
- 在所有测试的RNP交付方法中,马赛克主义普遍存在.
结论:
- 电穿孔是一种可行的多重基因组编辑方法,可以在猪肉中进行编辑.
- 优化RNP交付是必要的,以尽量减少基因编辑胚胎中的马赛克主义.
- 需要进一步的研究来提高异种移植多重基因组编辑效率.
