使用基于RT-ddPCR的IFN-γ基因表达试验监测抗原特异性细胞免疫反应

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 分子生物学分子生物学
• 传染性疾病 传染性疾病

背景情况:

• 以T细胞为媒介的免疫对于控制感染和疫苗疗效至关重要.
• 量化T细胞反应通常依赖于像ELISpot这样的测试,这可能是资源密集的.
• 干扰素- (IFN-γ) 是T细胞在免疫反应过程中产生的关键细胞因子.

研究的目的:

• 评估逆转录液滴数字PCR (RT-ddPCR) 测量T细胞介导免疫力的有效性.
• 评估IFN-γ mRNA表达的量化作为T细胞激活的标志物.
• 为了比较RT-ddPCR与已建立的ELISpot测定方法的灵敏度和可行性.

主要方法:

• 整体血液和外周血液单核细胞 (PBMCs) 被各种刺激剂刺激,包括CEF和SARS-CoV-2抗原.
• 使用RT-ddPCR量化IFN-γmRNA的表达.
• 用ELISpot测试进行比较,测量SARS-CoV-2特定的斑点形成单位 (SFU).

主要成果:

• 在刺激后大约4小时观察到IFN-γ mRNA表达的峰值.
• 通过RT-ddPCR检测到IFN-γ mRNA诱导,细胞数量低 (10,000个PBMC) 和兴奋剂度低.
• 在SARS-CoV-2接种疫苗的捐赠者中,在SFU和IFN-γ mRNA折叠激活之间发现了强烈的正相关性 (r = 0.78,p < 0.02).
• 通过RT-ddPCR检测显示,对ELISpot的敏感性相当.

结论:

• RT-ddPCR是一种有效的量化IFN-γ mRNA表达的方法,用于评估T细胞介导免疫力.
• 该试验很敏感,需要最小的细胞和低度的刺激剂.
• RT-ddPCR为评估细胞免疫反应提供了ELISpot试验的可行和敏感的替代方案.