优化可溶性重组TEV蛋白酶在两个E.E.中的生产. 大肠杆菌菌株 菌株
Matineh Shahriari1, Fatemeh Shafiee1,2, Fatemeh Moazen1
1Department of Pharmaceutical Biotechnology, School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran.
Avicenna journal of medical biotechnology
|November 28, 2024
概括
提高烟草蚀刻病毒 (TEV) 蛋白酶溶解度是其应用的关键. 这项研究通过优化表达条件和特定添加剂 (如贝他因) 在溶解缓冲器中增强了TEV蛋白酶溶解性.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质工程是指蛋白质的工程.
背景情况:
- 烟草蚀刻病毒 (TEV) 蛋白酶的低溶解性限制了其应用.
- TEV蛋白酶对于在不改变序列的情况下切割蛋白标签至关重要.
研究的目的:
- 为了提高TEV蛋白酶的可溶性.
- 为了确定最佳的表达条件和溶解剂,以增加TEV蛋白酶溶解度.
主要方法:
- 野生型和N23F突变TEV蛋白酶在大肠杆菌 (大肠杆菌) BL21 (DE3) 和原木菌株中的表达.
- 响应表面方法来优化培养条件 (IPTG度,化时间,温度).
- 在溶解缓冲器中选八种溶解剂,以评估它们对蛋白质溶解性的影响.
主要成果:
- 与野生类型相比,N23F突变TEV蛋白酶在大肠杆菌BL21 (DE3) 中可溶性产量增加了两倍.
- 在N23F突变体中,包容体的形成减少了约25%.
- 贝他因在两种大肠杆菌菌株中显著增强了N23F的可溶性表达.
- 烯酸盐,西利醇和甘氨酸对野生型TEV蛋白酶溶解性有效.
结论:
- TEV蛋白酶的N23F突变形式在大肠杆菌BL21 (DE3) 中具有更好的溶解性.
- 溶解缓冲器中的贝他因等添加剂有效地增加了N23F TEV蛋白酶在不同大肠杆菌菌株中的溶解度.


