在Fusobacterium nucleatum中开发基于SacB的反选择,以实现有效的等位基交换

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 分子生物学分子生物学
• 遗传学 是一个遗传学.

背景情况:

• Fusobacterium nucleatum是一种关键的口腔细菌,与人类健康有关.
• 基因工具正在推动对F. nucleatum在生物膜和宿主相互作用中的作用的理解.
• 基于反选择的未标记的框架内突变方法对基因操纵是有效的.

研究的目的:

• 为了测试Bacillus subtilis sacB基因作为Fusobacterium nucleatum中的可逆选择标记物的有效性.
• 开发一种可靠的方法,在野生类型的F. nucleatum.中产生未标记的基因突变.
• 推进F. nucleatum. 的遗传研究工具.

主要方法:

• 该 sacB 基因通过穿或自杀等离子体被引入 F. nucleatum .
• 应用了糖糖反选择来选择丢失了sacB含有的等离子体的细胞.
• 使用这种方法进行了tonB基因的内部删除和光酶基因的内置.

主要成果:

• 表达sacB的F.核对补充的糖糖表现出致命的敏感性.
• 糖的逆选择导致了完全的染色体质粒损失.
• 在野生类型的F. nucleatum.中实现了tonB的无标记的框架内删除和精确的露西法酶基因敲进.

结论:

• 基于sacB的反选择技术是产生F. nucleatum.未标记基因突变的可靠方法.
• 这种方法克服了以前技术的局限性,例如需要修改的主机.
• 这项研究扩大了F. nucleatum研究的遗传工具包,促进了对其生物作用的进一步调查.