简单的endoglycosidase辅助片映射工作流程用于治疗单克隆抗体中的非共识n-glycosylation的特征

科学领域:

• 生物化学和分子生物学
• 分析化学 分析化学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• N-链 glycosylation 是一个关键的蛋白质翻译后修改.
• 传统的N-链糖化发生在NXS/T动机内的Asn.
• 在NXS/T动机之外的Asn处非共识N-糖化越来越被认可,但由于不可预测的序列和低丰度,难以表征.

研究的目的:

• 开发和演示基于质谱 (MS) 的工作流程,用于在单克隆抗体 (mAbs) 中表征非共识N-糖化.
• 为应对与在异常部位识别和定量糖化相关的挑战.
• 通过更好地表征其糖结构,促进治疗性mAbs的发展.

主要方法:

• 为MS分析开发了一种内葡萄糖酶辅助的片映射工作流.
• 该工作流被测试在一个具有挑战性的案例中,涉及mAb与碎片抗原结合 (Fab) 区域中的非典型甘氨酸.
• 用Endoglycosidase治疗来切断糖结构,提高MS的电离效率,并使其与去amid化分化.

主要成果:

• 工作流成功地在一个mAb Fab区域的NPNNXN序列内确定了一个非典型的N-糖化位点.
• 内糖酶治疗增强了的电离,允许可靠量化糖占用率.
• 剩余的单/二糖类作为质量标签,促进糖位定位和半自动化数据处理.

结论:

• 开发的Endoglycosidase辅助片映射工作流提供了一个强大的解决方案,用于在治疗 mAbs.中表征非共识的N-糖化.
• 这种方法简化了在具有挑战性的非正规地点识别和定量糖化.
• 改进非共识型糖化酶的表征对于治疗生物制剂的开发和质量控制至关重要.