逆转录病毒CRISPR/Cas9介导基因向用于研究体外Th17差异化
Zejin Cui1, Pengkun Yuan2, Zhishan Zhao1
1Shanghai Immune Therapy Institute, Renji Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine.
Journal of visualized experiments : JoVE
|December 2, 2024
概括
这项研究提出了一种新的方法,用于在初级小鼠T细胞中使用逆转录病毒基因向来区分天真的T辅助17 (Th17) 细胞. 这种方法为研究Th17细胞分化和功能的传统基因改造提供了更快,更具成本效益的替代方案.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 产生IL-17A的T辅助17 (Th17) 细胞对于免疫反应至关重要,并与自身免疫性疾病有关.
- 试验室Th17极化试验被广泛用于研究分化调节,通常依赖于转基因小鼠.
- 使用淘汰赛小鼠的传统方法耗时,昂贵,易受细胞外部因素的影响.
研究的目的:
- 提出使用逆转录病毒基因向的Th17细胞分化替代方案.
- 为了使Th17差异化研究在初级小鼠T细胞中实现高效的基因淘汰.
- 提供分析逆转录病毒感染和Th17分化效率的方法.
主要方法:
- 在初级小鼠T细胞中针对CRISPR/Cas9介导基因的指导RNA的逆转录病毒转导.
- 使用定义的细胞因子尾酒将原始CD4 T细胞分化为Th17细胞.
- 流细胞计分析以评估逆转录病毒感染率和Th17细胞分化效率.
主要成果:
- 通过逆转录病毒基因向成功将原始T细胞分化为Th17细胞.
- 展示了一种有效的基因淘汰和随后的Th17极化协议.
- 流细胞测量方法的验证,用于评估关键测定参数.
结论:
- 本方案为研究Th17细胞分化和功能提供了有价值和高效的替代方案.
- 这种方法有助于研究特定基因在Th17生物学中的作用.
- 该方法克服了与传统淘汰赛小鼠模型相关的局限性.
