建立尼罗河的初级细胞培养方法和体外细胞敲除技术
Siqi Huang1,2,3, Shicen Wei1,2,3, He Jiao1,2,3
1Key Laboratory of Exploration and Utilization of Aquatic Genetic Resources, Ministry of Education, Shanghai Ocean University, Shanghai, 201306, People's Republic of China.
Marine biotechnology (New York, N.Y.)
|December 2, 2024
概括
这项研究建立了有效的方法来隔离和培养尼罗河的原始细胞,使得体外基因操纵. 优化的技术促进了基因淘汰,为鱼研究和水产养殖提供了必不可少的工具.
科学领域:
- 水产养殖和分子生物学
- 鱼类细胞培养和基因操纵
背景情况:
- 尼罗河鱼 (Oreochromis niloticus) 是一个关键的水产养殖物种和研究模型.
- 缺乏对初级细胞隔离,培养和体外基因操纵的系统研究.
研究的目的:
- 开发方法,从各种尼罗河鱼组织中分离初级细胞.
- 为尼罗河鱼建立体外基因操纵技术.
主要方法:
- 使用素或原酶对四种尼罗河鱼组织 (阴茎,肝脏,心脏,) 的酶性消化.
- 在淋巴细胞中使用EGFP,siRNA,lentivirus (LV) 和腺相关病毒 (AAV) 评估传染效率.
- 在初级淋巴细胞中使用siRNA和LV对Kdm6bb的基因敲除.
主要成果:
- 原酶 (0.1%) 对于生殖腺,肝脏和心脏是最佳的;素 (0.25%) 对于脏是最佳的.
- 在淋巴细胞中,siRNA-NC和LV-NC与AAV-NC相比,显示出优异的EGFP表达和细胞存活率.
- 通过qPCR和免疫光检测证实了Kdm6bb基因的成功淘汰.
结论:
- 提供了尼罗河鱼初级细胞隔离和培养的验证协议.
- 为尼罗河鱼建立了有效的体外基因操纵工具.
- 促进对尼罗河鱼分子调节机制和基因功能的进一步研究.


