快速-CRISPR:高度敏感的诊断试验用于检测PML::RARA异型在急性前兆细胞白血病的检测

科学领域:

• 分子诊断学 分子诊断学
• 血液学恶性瘤是什么
• 基于CRISPR的检测系统

背景情况:

• 急性促细胞白血病 (APL) 是一种具有高早期死亡率的医疗紧急情况.
• 目前的APL诊断方法是准确的,但耗时,需要专门的设备.
• 早期诊断APL对于及时干预和改善患者结果至关重要.

研究的目的:

• 开发和验证急性前兆细胞白血病 (APL) 的快速诊断工具.
• 使用基于CRISPR的系统检测PML::RARA融合转录,这是APL的标志.
• 为APL诊断建立一种敏感,特定和护理点的方法.

主要方法:

• 开发RAPID-CRISPR测定方法,使用向DNA内核酶的CRISPR转报器 (DETECTR) 系统.
• 纳入APL细胞系和患者样本 (n=74 APL,n=48对照) 进行野心验证.
• 采用PML::RARA特有的循环介导同热放大 (LAMP) 开头和异形特异的CRISPRRNA来提高特异性.

主要成果:

• 在患者样本中检测APL时,RAPID-CRISPR实现了100%的灵敏度和100%的特异性.
• 该试验显示出更高的灵敏度,检测到PML::RARA的仅1个副本,而RT-qPCR检测到10个副本.
• 一个无核酸提取,单步协议与侧向流读取成功实施.

结论:

• 快速CRISPR为APL诊断提供了一种快速 (<3小时),高度敏感和特定的方法.
• 该测试的简单性,成本效益和治疗地点的适用性使其对资源不足的地区具有价值.
• 通过RAPID-CRISPR及时诊断有助于迅速启动拯救生命的APL疗法.