在Aspergillus nidulans中改进了基因编辑和光蛋白标记,使用基于金门的CRISPR-Cas9等离子体系统

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 菌类学 菌类学是指菌类学.
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 克里斯普尔-Cas9促进精确的基因组编辑在线状真菌,如阿斯伯吉勒斯尼杜兰斯.
• 对于A. nidulans,现有的CRISPR-Cas9系统需要复杂的,多步骤的克隆程序.
• 对Cas9和sgRNA表达的等离子体构造是当前A. nidulans基因组编辑中的瓶.

研究的目的:

• 开发一个简单和用户友好的CRISPR-Cas9系统用于A. nidulans的基因组编辑.
• 为了简化表达Cas9和sgRNA的等离子体的构建,以实现高效的基因向.
• 为了实现精确,无痕的基因组修改和无标记基因标记在A. nidulans.

主要方法:

• 采用一阶段的金门反应,组装出表达Cas9和单指导RNA (sgRNA) 的等离子体.
• 该系统被测试了其在实现精确的核酸水平DNA替代中的效率.
• 无标记基因标记是通过将光蛋白序列与内源基因融合来进行的.

主要成果:

• 成功创建了一个高度简化的CRISPR-Cas9系统用于A. nidulans基因组编辑.
• 通过精确无痕的基因组编辑,包括核酸水平的DNA替代,证明了这一点.
• 通过将光蛋白与向基因融合来实现无标记基因标记.
• 开发和描述了A. nidulans的光蛋白.

结论:

• 开发的一步金门CRISPR-Cas9系统显著简化了A. nidulans的基因组编辑.
• 这种改进的系统促进了无痕基因编辑和无标记基因标记,增强了细丝真菌的研究.
• 编码调整的光蛋白的可用性将使更广泛的阿斯伯吉勒斯研究社区受益.