综合性宿主细胞蛋白在生物制药中通过使用TMT标记和信号增强增强的灵敏度增强质谱法策略进行分析

科学领域:

• 生物制药学分析分析
• 蛋白质组学是指蛋白质组学.
• 分析化学是一种分析化学.

背景情况:

• 主细胞蛋白 (HCP) 是生物制药生产中的关键杂质.
• 医疗人员可以影响产品的质量,免疫性和治疗疗效.
• 敏感检测低丰度的医疗保健人员对于生物制药安全至关重要.

研究的目的:

• 开发一种新的,高度敏感的质谱法 (MS) 方法,用于生物制药中的宿主细胞蛋白 (HCP) 分析.
• 为了增强残留HCP的MS信号,而不会改变它们的本源度.
• 改进在ppm以下级别的医疗保健人员的识别和量化.

主要方法:

• 利用宿主细胞溶解物作为信号增强通道.
• 采用同型TMT标签,用于增强MS信号检测.
• 应用质谱仪用于敏感的HCP识别和量化.

主要成果:

• 与之前的方法 (848 种蛋白质) 相比,在 NIST RM8671 mAb.中,已识别的 HCP (3475 种蛋白质) 显著增加.
• 在单克隆抗体 (mAbs) 中,成功识别了48种UPS1蛋白中的44种,其度范围为0.32-4.15ppm.
• 在没有丰富或耗尽步骤的情况下,在ppm以下的水平上展示了强大的HCP量化.

结论:

• 开发的MS信号增强方法为全面的HCP分析提供了一种敏感和强大的方法.
• 这一进步允许在非常低的水平 (<1 ppm) 上准确量化HCP,这对生物制药安全至关重要.
• 精简的工作流提供了一个有价值的工具,以确保治疗蛋白质的质量和安全性.