测序单克隆抗体变量区域使用多重电荷集成中下方策略和紫外线光解离
Jialiang Liu1, Zheyi Liu2, Heng Zhao3
1School of Pharmacy, China Medical University, Shenyang, 110122, China; CAS Key Laboratory of Separation Sciences for Analytical Chemistry, Dalian Institute of Chemical Physics, Chinese Academy of Sciences, Dalian, 116023, China; State Key Laboratory of Molecular Reaction Dynamics, Dalian Institute of Chemical Physics, Chinese Academy of Sciences, Dalian, 116023, China.
使用紫外光解离 (UVPD) 和多重电荷集成中下分析 (MCI-MDMS) 的新质谱法实现了治疗单克隆抗体 (mAbs) 的高序列覆盖,包括关键互补性确定区域 (CDR). 这一进步有助于对mAb发育进行准确的测序和翻译后修改分析.
科学领域:
- 生物化学和生物物理学
- 分析化学 分析化学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 治疗性单克隆抗体 (mAbs) 是针对性治疗的重要生物制药.
- mAb的特异性和亲和力取决于可变互补性决定区域 (CDR).
- 对mAb CDRs的精确测序对于表征至关重要.
研究的目的:
- 为全面的mAb测序开发一种新的质谱策略.
- 改进mAbs.的序列覆盖和翻译后修改 (PTM) 分析.
- 增强治疗药物的特征,用于药物发现和开发.
主要方法:
- 基于193nm紫外光解离 (UVPD) 的多重电荷集成中向下质谱法 (MCI-MDMS) 策略的开发.
- 整合来自不同充电状态的UVPD光谱,以增强序列覆盖.
- 应用该策略来测序两个不同的mAbs并识别PTMs.
主要成果:
- 来自不同电荷状态的UVPD光谱显示出高度的互补性,在集成后改善了整体序列覆盖.
- 两个mAbs实现了超过95%的序列覆盖率,包括CDR的完整覆盖率.
- 与传统的高能碰撞解离 (HCD) 方法相比,CDR序列覆盖率平均增加了30%.
- 能够准确地定位PTMs,包括糖化,lysine截断和谷氨酸循环.
结论:
- 集成的MCI-MDMS和UVPD战略提供了高序列覆盖率和可靠的PTM测定mAbs.
- 这种方法对分析抗体-药物合物,多克隆抗体和未知的mAbs.有希望.
- 提供了一个关键的工具,用于发现和开发的治疗 mAbs.
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