选择性招募合成的希斯酸转移酶可以提高CHO细胞的生产力

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学
• 细胞工程 细胞工程

背景情况:

• 工业生物生产依赖于中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞和转基因整合.
• 表观遗传修饰,特别是基因组乙化,极大地影响了转基因表达和生产标位.
• 通常用于转基因表达的细胞巨乳病毒 (CMV) 促进体,在CHO细胞中表现出低于最佳的组胺酸乙化.

研究的目的:

• 研究表观遗传操纵策略,以增强CHO细胞中的转基因表达.
• 评估基因组乙化在CMV促进体对单克隆抗体产生的影响.
• 为了比较氨酸转移酶 (HAT) 输送与DNA脱甲基化的疗效,以改善生物制造.

主要方法:

• 利用CRISPR-dCas9系统,将素乙转移酶的催化域传递给CHO细胞中的CMV促进体.
• 使用dCas9与5-甲基细胞酸二氧化酶融合,用于选择性促进体DNA脱甲基化.
• 测量了单克隆抗体mRNA表达,RNA聚合酶II活性和细胞特异性生产力.

主要成果:

• 通过CRISPR-dCas9调解的基因组乙化增加了单克隆抗体mRNA表达的12倍.
• 基因组乙化在增强表达方面比DNA脱甲基化更有效.
• 乙化通过增加RNA聚合酶II的酸化和活性来促进转录激活,从而促进脱离促进物-近位暂停.
• 这种方法几乎使CHO细胞的抗体标位和特异性生产率翻了一番.

结论:

• 通过向性基因素乙化对CMV促进体的表观遗传操纵是一种强有力的策略,可以增强CHO细胞中的生物生产.
• 对HAT域的CRISPR-dCas9交付为提高生物制造效率提供了一个有前途的工具.
• 了解和调节表观遗传景观可以显著提高工业基于细胞的生产系统.