标有pyrenemethylamine的寡糖的光离子化:一种新的MALDI-TOF前体离子型,用于高效的碎片化
Andreas H Franz1, Nathan Ta2, Ella Nguyen2
1Department of Chemistry, University of the Pacific, 3601 Pacific Avenue, Stockton, CA, 95211, USA. afranz@pacific.edu.
这项研究引入了一种快速的方法来标记和分析使用1-pyrenemethylamine (1-PMA) 和质谱的寡糖. 这种新技术使得在低 Picomole 水平上有效阐明 glycan 结构.
科学领域:
- 分析化学 分析化学
- 葡萄糖生物学 葡萄糖生物学
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 橄糖类分析对于理解生物过程至关重要.
- 现有的甘氨酸表征方法可能耗时,需要更大的样本数量.
- 需要开发快速而敏感的分析技术.
研究的目的:
- 开发一种新,快速和灵敏的方法来标记和分析寡糖.
- 通过对1-甲基胺 (1-PMA) 进行共价标记和矩阵辅助激光溶解/电离 (MALDI) 飞行时间 (TOF) 质谱法 (MS) 来表征寡糖类.
- 为了在低样本度下详细阐明甘氨酸结构.
主要方法:
- 在75°C下用1-pyrenemethylamine (1-PMA) 用于15分钟对寡糖的共价标记.
- 用定量高性能液体染色学 (HPLC) 分离标记的寡糖类,不到20分钟.
- 使用离线MALDI-TOF-MS与从2,5-二基酸 (DHB) 矩阵中通过光诱导的减小消除生成的新型前体离子进行表征.
- 对结构信息的碎片化模式 (Y-,B-离子) 的分析.
主要成果:
- 使用1-PMA对寡糖类的高产量标签迅速实现.
- 在不到20分钟的时间内实现了标记的甘氨酸的高效分离.
- 对一种新的MALDI质谱前体离子的观测,使高能碎片化成为可能.
- 在低皮科莫尔水平上观察到对寡糖的优异碎片效率 (Y-,B-离子,组合损失).
- 从标准甘氨酸蛋白和生物工程β-乳糖球蛋白中成功分析了甘氨酸.
结论:
- 开发的方法提供了一种快速,高产和敏感的方法来分析寡糖.
- 新的MALDI前体离子和碎片化策略显著提高了结构阐明能力.
- 这种技术适用于标准和复杂的生物甘氨酸样本,包括来自Pichia pastoris的样本.
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