相关实验视频
Updated: Jun 5, 2025
06:40
Small-Scale Extraction of Caenorhabditis elegans Genomic DNA
Published on: June 7, 2022
5.1K
开发一种Copro-RPA-CRISPR/Cas12a试验,用于检测从狗中分离出来的 Echinococcus granulosus 核酸,使用基于 NaOH 的 DNA 提取方法
Guoqing Shao1, Xiaowei Zhu1, Ruiqi Hua1
1Department of Parasitology, College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University, Chengdu, P. R. China.
PLoS neglected tropical diseases
|December 12, 2024
概括
一种新的RPA-CRISPR/Cas12a测定方法可以准确地检测狗便中的E. granulosus蛋. 这种快速的,可视化的点照顾测试有助于控制囊性球菌 (CE) 传播.
科学领域:
- 兽医寄生虫学 兽医寄生虫学
- 分子诊断学 分子诊断学
- 动物传染病控制和控制
背景情况:
- 囊性乙球菌 (CE),由乙球菌 (Echinococcus granulosus) 引起,是一种通过受污染的食物和水传播的重大动物性疾病.
- 准确检测狗便中的E. granulosus蛋对于实施有效的疾病预防策略至关重要.
- 需要用于CE控制的快速,可视化解释的临床试验.
研究的目的:
- 开发和验证一种新型的重组酶聚合酶放大 (RPA) 和CRISPR-Cas12a试验,用于检测狗中的E. granulosus.
- 评估测试的性能,包括灵敏度,特异性和现场适用性.
- 将开发的试验与现有的诊断方法进行比较.
主要方法:
- 结合RPA和CRISPR-Cas12a,准E.颗粒体线粒体nad2基因,具有侧向流带检测.
- 集成了一个简单的NaOH基DNA提取方法,以改善现场使用.
- 使用狗便DNA验证了测定,并将其与定量PCR (qPCR) 和商业ELISA套件进行了比较.
主要成果:
- 通过RPA-CRISPR/Cas12a测定,可以达到1fg/μLDNA的检测极限,并且与其他带状没有交叉反应.
- 在临床样本中,RPA-CRISPR/Cas12a试验的灵敏度为68%,RPA-CRISPR/Cas12a-NaOH试验的灵敏度为45%.
- 现场表现显示与qPCR和ELISA的良好或相当一致,表明可靠的诊断潜力.
结论:
- 在RPA-CRISPR/Cas12a和RPA-CRISPR/Cas12a-NaOH测定提供了增强的诊断灵敏度,以检测E.粒状.
- 这些测定使得快速的,点的护理测试,超越以前的方法.
- 开发的测定方法显示,在资源有限的环境中,对E. granulosus的监测充满希望.
