优化了来自登革热病毒血清型1至4的包膜糖蛋白域III的高产率表达

科学领域:

• 病毒学 病毒学
• 免疫学 免疫学 免疫学
• 蛋白质表达方式

背景情况:

• 登革热病毒 (DENV) 包膜糖蛋白域III (EDIII) 对于病毒进入至关重要,并产生中和抗体.
• EDIII是子单位疫苗和单克隆抗体 (mAb) 隔离的关键目标.
• 再组合EDIII的高效生产对于疫苗和治疗开发至关重要.

研究的目的:

• 为了优化埃舍里奇亚大肠杆菌 (E. coli) 中所有四种DENV血清型中的复合EDIII蛋白的高产量的表达.
• 为了验证纯化的DENV EDIII蛋白质的结构完整性和功能.
• 评估不同大肠杆菌菌株对DENV EDIII表达的适用性.

主要方法:

• 来自1-4血清型的DENV EDIII蛋白质在各种大肠杆菌菌株中的重组表达.
• 蛋白质的净化和重新折叠.
• 使用循环二元化 (CD) 和富里埃变换红外光谱 (FTIR) 的结构验证.
• 通过与酶相关的免疫吸收试验 (ELISA),共免疫沉 (Co-IP) 和竞争性抑制试验进行功能验证.

主要成果:

• 在经过测试的大肠杆菌菌株中,DENV EDIII蛋白显示出不同表达水平.
• 净化和重新折叠的EDIII蛋白质保持了结构完整性.
• 功能性测试证实有效结合中和人性化mAb (513) 和病毒进入抑制.
• 评估了EDIII在阻断病毒进入方面的功效.

结论:

• 建立了针对DENV EDIII蛋白的高产率表达的优化方法.
• 重组EDIII的结构和功能完整性得到证实.
• 对于所有DENV EDIII血清型来说,通用表达系统并不理想,因此在疫苗开发中需要针对菌株进行特定优化.