使用CRISPR-Cas9介导的敲定蛋白技术生成一个危细胞记者斑马鱼系Ki (pdgfrb-P2A-GAL4-VP16) 的协议
Huaxing Zi1, Xiaolan Peng2, Jiulin Du3
1Institute of Neuroscience, State Key Laboratory of Neuroscience, CAS Center for Excellence in Brain Science and Intelligence Technology, Chinese Academy of Sciences, 320 Yue-Yang Road, Shanghai 200031, China; University of Chinese Academy of Sciences, 19A Yu-Quan Road, Beijing 100049, China; Dongguan Innovation Institute, Guangdong Medical University, 1 Xin-Cheng Road, Dongguan, Guangdong 523808, China.
STAR protocols
|December 14, 2024
概括
研究人员开发了一种新的斑马鱼模型来研究皮细胞,这些细胞是形成血脑屏障的关键细胞. 这个协议使用CRISPR基因编辑来创建一个记者线来可视化这些重要细胞.
科学领域:
- 神经科学是一个神经科学.
- 遗传学 遗传学是一种遗传学.
- 发展生物学 发展生物学
背景情况:
- 细胞是重要的壁画细胞,支持血管完整性和功能.
- 细胞在血脑屏障 (BBB) 的发展和维护中发挥着至关重要的作用.
- 在体内可视化皮质细胞对于理解它们在健康和疾病中的作用至关重要.
研究的目的:
- 介绍一个详细的协议,以产生一个危细胞记者斑马鱼线.
- 为了使在体内成像和研究大脑周细胞.
- 为创建其他细胞特异性记者线提供一种多功能方法.
主要方法:
- 通过CRISPR-Cas9介导的敲定技术来产生记者线.
- 识别高效的单向导RNA (sgRNA),用于精确的基因编辑.
- 用于向基因改造的供体等离子体的构造.
- 产生,维护和体内成像中Knockin斑马鱼线.
主要成果:
- 成功生成了一个危细胞记者斑马鱼线,Ki(pdgfrb-P2A-GAL4-VP16).
- 建立了一个可靠的协议来创建和维护记者线.
- 证明了该线对脑周细胞的体内成像的有用性.
结论:
- 开发的协议为细胞研究提供了有价值的工具.
- 这种斑马鱼模型有助于研究血脑屏障的形成和功能.
- 该方法可用于生成其他细胞类型的记者线.
