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Updated: Jun 12, 2025

07:56
Genome Editing in Mammalian Cell Lines using CRISPR-Cas
Published on: April 11, 2019
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使用PASTE对哺乳动物细胞进行精确的千基基量基因组插入.
Christopher W Fell1,2,3,4, Cian Schmitt-Ulms1,2,3,4,5, Dario V Tagliaferri1,2,3,4
1Harvard Medical School, Harvard University, Boston, MA, USA.
Nature protocols
|December 15, 2024
概括
通过特定地点向元件 (PASTE) 进行可编程添加,可以在哺乳动物基因组中进行精确,高效和大规模的DNA插入. 这项技术为基因整合应用提供了改进的编辑,纯度和可编程性.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 遗传学 是一个遗传学.
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 可编程的基因整合对研究和治疗至关重要.
- 现有的方法难以在哺乳动物基因组中进行大量的DNA插入.
研究的目的:
- 通过特定地点准元件 (PASTE) 技术引入和详细介绍可编程添加.
- 为精确的基因整合提供使用PASTE的综合性协议.
主要方法:
- PASTE将特定站点的整合酶与主要编辑相结合,用于定向的DNA插入.
- 协议详细说明了EGFP在人类NOLC1和ACTB地点的整合.
- 读出方法包括下一代测序和滴滴数字PCR.
主要成果:
- PASTE实现了高达60%的效率,精确插入大型DNA货物 (≥36kb).
- 与以前的方法相比,证明了更好的编辑效率,纯度和可编程性.
- 成功的应用包括框架内蛋白质标记和多重插入.
结论:
- PASTE是一种多功能且高效的工具,用于在哺乳动物基因组中整合大型DNA序列.
- 该协议为各种基因组位置和有效载荷提供了定制PASTE实验.
- PASTE使得快速 (2周) 和精确的基因插入用于研究和治疗开发.

