在大肠杆菌中改善可溶性cathepsin B和L的复合表达
Christina Möller1, Niklas Rimkus1, Ferdinand F O Skala1
1Institute of Biochemistry, Department of Biotechnology and Enzyme Catalysis, University of Greifswald, Greifswald, Germany.
Applied microbiology and biotechnology
|December 16, 2024
概括
研究人员开发了一种高效的方法,可以在大肠杆菌中产生大量可溶性甲素B和L酶. 这一突破有助于开发针对SARS-CoV-2和胰腺炎等疾病的新疗法.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 酶学 是一种酶学.
背景情况:
- 囊类甲素,包括甲素B和L,涉及各种疾病,如急性胰腺炎和SARS-CoV-2感染.
- 针对这些酶提供了显著的治疗潜力.
- 溶解和活性酶的高产量对于选强效和选择性抑制剂至关重要.
研究的目的:
- 建立一个简单有效的协议,用于可溶性和活性小鼠甲素B和L的重组表达.
- 为了优化治疗开发的表达水平和产量.
- 为了研究C端在甲素B活性中的作用.
主要方法:
- 在大肠杆菌Shuffle® T7 Express中,鼠类甲素B和L的重组表达.
- 使用固定离子亲和染色法进行净化.
- 局部导向的突变发生,以研究 cathepsin B. 的 C-终端.
主要成果:
- 获得的高表达产量:80 ± 2毫克L-1对于procatepsin B和37 ± 2毫克L-1对于procatepsin L.
- 证明了大肠杆菌SHuffle® T7 Express在细胞质中形成二硫化物桥梁的能力,产生可溶性酶.
- 发现删除甲素B的短C终端片并没有显著改变其体外活性.
结论:
- 开发的协议提供了一种高效的方法,用于生产可溶和活性甲素B和L.
- 取得的高产量是与以前的方法相比显著的改进,促进了药物发现.
- 卡塞普辛B的C端似乎对其酶活性的影响很小.
