开发和验证基于RAA-CRISPR/Cas12a的检测方法,用于检测猪类罗塔病毒
Siyu Huang1,2, Longhuan Du2, Song Liu1
1Animal Disease Prevention and Food Safety Key Laboratory of Sichuan Province, College of Life Sciences, Sichuan University, Chengdu 610064, China.
Animals : an open access journal from MDPI
|December 17, 2024
概括
使用复合酶辅助放大 (RAA) 和CRISPR/Cas12a的猪轮状病毒 (PoRV) 新快速检测方法具有高灵敏度和特异性. 这一进步有助于猪养殖,通过快速识别PoRV,减少经济损失.
科学领域:
- 兽医病毒学 兽医病毒学
- 分子诊断学 分子诊断
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 小猪腹是由诸如猪轮状病毒 (PoRV) 等病原体引起的,导致猪业遭受重大经济损失.
- 目前的PoRV检测方法可能缺乏有效管理养猪疾病所需的敏感性或特异性.
- 准确和快速的PoRV检测对于控制其传播和缓解小猪生长迟缓至关重要.
研究的目的:
- 开发一种高度敏感和特定的方法,同时检测猪轮状病毒A (RVA) 的G5和G9基因型.
- 创建一个快速的,可在现场部署的诊断工具,用于在小猪中识别PoRV.
主要方法:
- 从PoRV G5和G9基因型中测序NSP3基因.
- 开发一种检测试验,将复合酶辅助放大 (RAA) 与CRISPR/Cas12a技术相结合.
- 优化RAA-CRISPR/Cas12a反应系统的灵敏度,特异性和速度.
主要成果:
- 该RAA-CRISPR/Cas12a方法实现了2.43副本/μL的检测极限,显示了比qPCR高十倍的灵敏度.
- 该试验显示高特异性,没有对其他常见的猪病毒病原体的交叉反应.
- 使用RAA-CRISPR/Cas12a的临床样本分析显示与qPCR有很好的一致性 (科恩的卡帕=0.952).
- 该方法提供视觉光结果,不需要专门的实验室设备.
结论:
- 开发的RAA-CRISPR/Cas12a测定是一种敏感,特异性和快速的工具,用于检测PoRV G5和G9基因型.
- 这种方法为兽医环境中的现场PoRV诊断提供了有希望的替代方案,有助于猪养殖中的疾病控制.
- 该技术促进了小猪腹的有效管理,有助于减少猪业的经济损失.
