快速LC-MS/MS对人类和老鼠肺组织中的原蛋白和弹性质交叉链的评估,采用一种新的生物分析替代矩阵方法

科学领域:

• 生物化学 生化学
• 细胞外矩阵生物学 细胞外矩阵生物学
• 质谱测量质量谱测量

背景情况:

• 纤维性疾病,包括异常性肺纤维化 (IPF),是由细胞外矩阵 (ECM) 交叉连接的改变驱动的.
• 目前分析ECM交叉连接的方法耗时且劳动密集,限制了高通量分析.
• 精确量化特定的交叉链接,如二氧化西诺氨酸 (DHLNL),对于了解疾病进展至关重要.

研究的目的:

• 开发一种快速有效的方法来测量ECM交联动态.
• 通过使用一种新的替代矩阵方法,提高交联量化的分析完整性.
• 应用开发的方法来评估肺纤维化中的交叉链接,并评估潜在的治疗干预措施.

主要方法:

• 开发了一种精简的样品制备和液体染色学-并联质谱 (LC-MS/MS) 工作流程,将分析时间缩短到每样两分钟.
• 创建了一个新的基于组织的代孕矩阵,具有不可检测的内源DHLNL,用于更相关的标准矩阵量化.
• 应用了快速LC-MS/MS方法来分析人类IPF肺组织和小鼠纤维化模型中的DHLNL水平.

主要成果:

• 实现了对ECM交联的样本分析时间的显著减少.
• 与健康捐赠者相比,人类IPF肺组织中显示DHLNL水平增加.
• 在一只纤维化小鼠模型中观察到高DHLNL,该模型被一种抗纤维化化合物减轻.

结论:

• 开发的快速LC-MS/MS测定为量化ECM交联提供了一种有效的方法.
• 增加的DHLNL是肺纤维化中的生物标志物,可以检测其通过抗纤维性药物的调节.
• 这种测试有可能评估药物化合物在治疗纤维性疾病中的疗效.