同时检测蛋白质和miRNA在单个细胞外囊层使用数字双CRISPR-Cas检测
Xun Xu1, Yuanyue Zhang1, Jiajia Liu1,2
1School of Biomedical Engineering, Tsinghua University, Beijing 100084, China.
ACS nano
|December 17, 2024
概括
一个新的数字双CRISPR-Cas驱动的单个EV评估 (ddSEE) 系统可以同时检测单个细胞外囊中的蛋白质和microRNA. 这一突破为疾病分析和诊断提供了高准确度.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子诊断学 分子诊断学
- 细胞外囊泡研究研究
背景情况:
- 单细胞外囊泡 (EV) 分析对于疾病分析至关重要,因为EV的异质性.
- 现有的方法对于在单个EV中多重检测蛋白质和microRNA缺乏可靠性.
研究的目的:
- 开发一个数字双CRISPR-Cas驱动的单个EV评估 (ddSEE) 系统,同时检测单个分子级别的表面蛋白和内部微RNA (miRNA).
- 建立一种高度可靠的方法,用于单个电动汽车的多重分析.
主要方法:
- 开发了一种 ddSEE 系统,使用 CRISPR-Cas12a 来检测表面蛋白质 (通过抗体-DNA 结合体) 和 CRISPR-Cas13a 来进行内部 miRNA 分析 (通过 EV-脂质体融合).
- 将CRISPR-Cas系统集成到一个微流体芯片中,其中有188,000个微波用于数字测试格式.
- 采用光成像来绝对量化miRNA/蛋白质阳性EVs,达到214 EVs/μL的检测极限.
主要成果:
- ddSEE系统成功地使单个EV中表面蛋白和内部miRNA的同时检测成为可能.
- 在没有偏差的情况下实现了miRNA/蛋白质阳性EV的绝对量化.
- 在使用31个血液样本将乳腺癌患者与健康捐赠者区分开来时,诊断准确度达92%.
结论:
- ddSEE系统为单个EV分析提供了可靠,用户友好和多重化的方法.
- 这项技术显示出在推进电动汽车研究和临床诊断,特别是癌症检测方面有很大的潜力.
