使用单一列与互补的离子交换和疏水相互作用染色学方法的反感性寡核酸的混合模式分离
Artaches A Kazarian1, Jung Hwa Lee1, Branko Mitasev1
1Genetics Guided Dementia Discovery (G2D2), Eisai, Inc. 35 Cambridge Park Drive, Suite 200, Cambridge, MA, 02140, USA.
这项研究展示了混合模式染色学,将离子交换 (AEX) 和疏水相互作用染色学 (HIC) 结合起来,用于分析和净化反感性寡核酸. 该方法有效地将酸 (PS) 目标与二 (PO) 杂质分离,提供了有价值的净化策略.
科学领域:
- 分析化学 分析化学
- 染色体学 染色体学 是一种染色学.
- 橄核酸合成和分析
背景情况:
- 反感性寡核酸 (ASOs) 是关键的治疗药物,需要高纯度才能有效.
- 立体控制的酸 (PS) 连接在ASO中很常见,需要选择性净化方法.
- 传统的染色学方法在解决密切相关的杂质上可能受到限制,例如基 (PO) 种类.
研究的目的:
- 研究混合模式染色学 (MMC) 结合离子交换 (AEX) 和疏水相互作用染色学 (HIC) 进行ASO分析和净化.
- 评估AEX和HIC在单个混合模式列上的保留行为和分离能力.
- 评估该方法在将PS改性ASO与PO杂质分离方面的有效性.
主要方法:
- 系统评估三模静止阶段 (Scherzo-SS-C18) 具有逆相,AEX和离子交换 (CEX) 功能.
- 将开发的MMC方法应用于替代逆相/AEX支持 (Newcrom BH).
- 优化色谱条件,包括有机修饰剂百分比,盐类型,温度,pH值和缓冲成分.
主要成果:
- 在三模阶段表现出U形保留,归因于AEX和HIC机制的结合.
- 在单个混合模式列上使用AEX和HIC的组合实现了PS目标与PO杂质的分离.
- 确定了NaCl作为一种有效的盐来溶解PS和PO杂质,在半制剂尺度上,优化HIC的纯度为60-80%,回收率为52-76%.
结论:
- 混合模式染色学,集成AEX和HIC,提供了一个强大的平台来分析和净化反意义寡核酸.
- 在非脱条件下和高盐矩阵中,HIC提供了净化优势,可能没有脱盐步骤.
- 开发的MMC方法是实现高纯度ASO的有价值的替代方案,补充了传统的净化技术.
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