开发一种新的捕获步骤,用于净化抗原结合片段 (Fabs)
Anupa Anupa1, Anurag S Rathore2
1School of Interdisciplinary Research, Indian Institute of Technology Delhi, New Delhi, India.
Protein expression and purification
|December 19, 2024
概括
本研究介绍了一种具有成本效益的方法,用于使用盐沉和疏水相互作用色谱 (HIC) 净化抗原结合碎片 (Fabs). 这种替代方案避免了昂贵的亲和染色学,为这些生物治疗药物提供了更经济的生产过程.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 生物技术是生物技术.
- 蛋白质净化 蛋白质净化
背景情况:
- 抗原结合片段 (Fabs) 越来越多地被用作生物治疗药物,与单克隆抗体 (mAbs) 相比,它们具有优势,比如改善组织透率和较少的副作用,因为它们的尺寸较小,缺乏Fc区域.
- 传统的Fab净化方法通常依赖于蛋白质L染色学,这对于大规模生产来说是有效但昂贵的.
- 在Fabs中缺少Fc区域,因此无法使用蛋白A染色谱,这是mAbs.的标准捕获方法.
研究的目的:
- 开发和评估一种具有成本效益的捕获色谱步骤,用于净化抗原结合碎片 (Fabs).
- 建议替代昂贵的亲和染色学方法,如蛋白质L的Fab净化.
- 用一种新的盐沉和疏水相互作用色谱 (HIC) 工艺来评估Fabs的纯度和回收.
主要方法:
- 开发了一种两步捕获过程,从盐沉开始,以提高Fab纯度.
- 性相互作用染色学 (HIC) 被用作随后的净化步骤.
- 逆相高性能液态染色学 (RP-HPLC) 用于评估纯度,并计算了整体工艺回收.
主要成果:
- 盐沉增加了Fab纯度,从最初的30%提高到65%.
- 随后的HIC步骤进一步提高了纯度,通过RP-HPLC测量到80%.
- 综合净化过程实现了高的整体回收率,超过95%.
结论:
- 盐沉后的HIC为Fab捕获色谱提供了一个可行的和具有成本效益的替代方案.
- 与传统的基于亲和力的净化策略相比,这种方法显著降低了商品成本.
- 拟议的工艺在纯度提升和Fab净化回收方面都表现出高效率.
