基于CRISPR/Cas12a和复合酶聚合酶放大剂的快速现场核酸检测子循环病毒

科学领域:

• 兽医病毒学 兽医病毒学
• 分子诊断学 分子诊断
• 生物传感技术的技术

背景情况:

• 子循环病毒 (DuCV) 在养殖中造成显著的免疫抑制和经济损失.
• 由于缺乏有效的疫苗和治疗方法,需要改进诊断工具.
• 快速和敏感的检测对于DuCV的预防和控制至关重要.

研究的目的:

• 开发一种快速,敏感和特定的检测方法来检测子循环病毒 (DuCV).
• 通过使用可访问技术,使DuCV能够在现场检测.

主要方法:

• 开发一个侧流带 (LFS) 试验.
• 使用复合酶聚合酶放大 (RPA) 针对DuCV复制蛋白 (Rep).
• 集成的CRISPR/CRISPR相关蛋白12a (Cas12a) 可在37°C进行增强检测,并进行视觉解释.

主要成果:

• RPA-CRISPR/Cas12a-LFS测定在45分钟内提供了结果.
• 达到了2.6个基因拷贝的低检测极限.
• 具有很高的特异性,与其他六种鸟类病毒没有交叉反应,并且在97个水禽样本中与实时定量PCR100%一致.

结论:

• 开发的RPA-CRISPR/Cas12a-LFS是一种用户友好,快速,灵敏和准确的方法.
• 这种测试具有在现场检测DuCV的巨大潜力.
• 促进对子DuCV疫情的及时诊断和管理.