设计和开发光谱光度酶化化物试验

科学领域:

• 分析化学 分析化学
• 生物化学 生化学
• 环境科学 环境科学

背景情况:

• 自由化物 (fCN) 的确定在工业,环境,食品和临床领域至关重要.
• 现有的fCN分析酶方法尽管具有选择性和温和反应条件,但仍未得到充分利用.

研究的目的:

• 为选择性确定自由化物 (fCN) 开发新的光谱光度酶分析.
• 为了证明fCN量化高吞吐量,轻度和化物排毒试验的概念证明.

主要方法:

• 使用化二水酶 (CynD) 或两种酶系统 (化水酶[CynH]和形式酶[AmiF]) 进行fCN的酶性水解.
• 使用依赖NAD的形式脱酶 (FDH) 将产生的形式转化为NADH.
• 通过将四盐 (WST-8) 减少在微型板格式中,对NADH进行色度定量.

主要成果:

• 开发了两个酶分析格式:一个两酶 (CynD-FDH) 和一个三酶 (CynH-AmiF-FDH) 系统.
• 与两种酶系统 (LOD:10.7μmol/L,LOQ:32.4μmol/L) 相比,三种酶系统表现出更高的性能,检测限度 (7.00μmol/L) 和定量限度 (21.2μmol/L) 较低.
• 测试表明选择性 (除了甲酸干扰),在温和条件下运行,并在分析期间解毒fCN.

结论:

• 开发的酶分析提供了选择性,高通量和环保的方法来确定自由化物.
• 这些测试需要最小的试剂和酶,在温和的条件下运行,并且比传统方法具有优势.
• 新型测定适用于需要敏感和高效的fCN定量化的各种应用.