开发了一种连续激光微剖切组织切割工作流程,用于在新鲜冷组织部分中进行药物的空间和定量分析

科学领域:

• 生物医学成像学 生物医学成像学
• 分析化学是一种分析化学.
• 分子病理学分子病理学

背景情况:

• 质谱成像 (MSI) 提供了分子的空间分布,但由于矩阵效应和不完整的提取,绝对量化是有限的.
• 激光捕获微解剖 (LCM) 与LC-MS/MS相结合,可以提高量化,但对于整个组织查缺乏吞吐量.
• 目前的MSI方法难以绝对量化,并且需要更高的吞吐量来进行全面的组织分析.

研究的目的:

• 开发和验证使用激光微解剖 (LMD) 进行新鲜冷组织截面的定量分子分析的高通量工作流.
• 为了使多个组织微样本从单个部分的顺序采集,以后提取和LC-MS/MS分析.
• 评估拟议的LMD工作流程的效率,产量和吞吐量,用于空间空间应用.

主要方法:

• 在新鲜冷的小鼠大脑和肝脏组织段 (20微米) 上,开发96平方微网格模板,用于自动化,不同尺寸 (30-500微米) 的顺序性LMD切割.
• 使用了Leica LMD系统,多个放大 (5x-63x) 可用于精确的组织微解剖和收集到96孔板格式.
• 评估了视觉和喷雾标准的组织切割产量 (78-91%),并测量了LMD吞吐量 (19-37分钟/截面).

主要成果:

• 在LMD工作流程中,成功地生成了96孔板格式的序列组织切割,实现了78%至91%的收益率.
• 每个组织部分的吞吐量在19到37分钟之间,这取决于所使用的微网格模板和放大.
• 随后的LC-MS/MS分析表明,该工作流能够确定特定化合物的下限量化值 (LLOQ).

结论:

• 与传统的MSI或手动LCM方法相比,拟议的LMD工作流显著提高了组织部分定量分子分析的吞吐量.
• 这种自动化,顺序的微解剖方法通过使高吞吐量组织样本收集用于LC-MS/MS量化来促进空间奥米克研究.
• 工作流为寻求将空间信息与复杂生物组织中分子的绝对定量结合的研究人员提供了宝贵的工具.