开发用于检测PHEV,PRV和CSFV的三重晶体数字RT-PCR
Kaichuang Shi1,2,3, Xin Hu2, Yanwen Yin3
1School of Basic Medical Sciences, Youjiang Medical University for Nationalities, Baise, China.
Frontiers in veterinary science
|December 27, 2024
概括
一种新的三重晶体数字逆转录PCR (cdRT-PCR) 测定方法可以快速准确地检测和区分三个主要的猪病毒:猪血凝固性脑炎病毒 (PHEV),猪伪狂犬病病毒 (PRV) 和古典猪瘟病毒 (CSFV). 这种方法为猪病诊断提供了卓越的灵敏度和特异性.
科学领域:
- 兽医病毒学 兽医病毒学
- 分子诊断学 分子诊断
- 控制和控制猪病 控制和控制猪病
背景情况:
- 猪血性脑炎病毒 (PHEV),猪伪狂热病毒 (PRV) 和古典猪瘟病毒 (CSFV) 是重要的全球猪病原体.
- 这些病毒引起类似的神经症状,使准确的诊断和疾病管理复杂化.
- 需要一种诊断方法,可以同时检测和区分这三个普遍存在的猪病毒.
研究的目的:
- 开发和验证一种新的三重晶体数字逆转录-PCR (cdRT-PCR) 试验.
- 该试验旨在在单一反应中同时检测和区分PHEV,PRV和CSFV.
- 用临床样本评估开发的试验的灵敏度,特异性,可重复性和诊断性能.
主要方法:
- 设计针对PHEV的N基因,PRV的gB基因和CSFV的5'未翻译区域 (5'UTR) 的特定原料和探针.
- 开发一种三重cdRT-PCR试验,用于同时检测三个目标病毒.
- 验证试验的性能特征,包括检测极限 (LOD),特异性,可重复性,并与使用1367个临床组织样本的参考多重实时定量RT-PCR (RT-qPCR) 试验进行比较.
主要成果:
- 三重cdRT-PCR试验显示出高灵敏度,LOD为4.812,4.047和5.243副本/反应,分别为PHEV,PRV和CSFV,大约是多重RT-qPCR的50倍.
- 观察到优异的特异性,没有对其他常见的猪病原体 (FMDV,PRRSV,PEDV,SIV,TGEV,PoRV,PCV2) 的交叉反应.
- 证实了高重复性,试验内CVs为0.73-1.87%和试验间CVs为0.57-2.95%. 对1367个临床样本的分析显示,PHEV的阳性率为3.44%,PRV为1.24%,CSFV为1.90%,与参考方法相比,巧合率为98.98%,卡帕值为0.94.
结论:
- 开发的三重cdRT-PCR测定是一种非常快速,灵敏和准确的工具,用于同时检测和区分PHEV,PRV和CSFV.
- 这种测试为关键猪病毒病的诊断能力提供了显著的进步.
- 该试验的性能使其适合在猪群中进行常规监测和诊断.
