开发高性能诱导式和分泌式表达载体和宿主系统,用于增强重组蛋白质生产
Sunghyun Yoon1,2, Keun Seok Seo1, Nogi Park1
1Department of Comparative Biomedical Sciences, College of Veterinary Medicine, Mississippi State University, Mississippi state, MS, 39762, USA.
Scientific reports
|December 27, 2024
概括
我们在金色葡萄球菌中开发了一种新的可诱导表达系统,用于高产量生产无脂聚糖 (LPS) 复合蛋白. 该系统可实现高效的分泌和净化,为生物医学研究和工业提供了宝贵的工具.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 微生物工程 微生物工程
- 蛋白质生产 蛋白质生产
背景情况:
- 无脂聚糖 (LPS) 的重组蛋白质生产对于生物医学应用至关重要.
- 由于它们的细胞壁结构和分泌途径,格兰阳性细菌在蛋白质表达方面比大肠杆菌具有优势.
- 现有的Gram阳性细菌的诱导表达系统在实现高产量方面存在局限性.
研究的目的:
- 开发一种新型的诱导和分泌表达系统,用于在金黄色葡萄球菌中产生高产量,无LPS的重组蛋白质.
- 为高效的蛋白质分泌和净化设计一个强大的表达宿主和一个多功能等离子体.
主要方法:
- 开发了pKS81等离子体,其中包括uhpT促进剂用于葡萄糖-6-酸盐 (G6P) 诱导式表达和SecB依赖的信号用于分泌.
- 工程 Staphylococcus aureus LAC9 主体菌株,缺乏uhpT和安全相关的基因,为构成性HptARS激活和提高安全性.
- 使用亲和色谱来净化重组蛋白质.
主要成果:
- 实现了高产量的重组蛋白,包括葡萄球菌白血素E和人体附录A2,高达900 mg/L.
- 证明成功分泌和净化 prokaryotic 和 eukaryotic 复合蛋白质.
- 建立了一个强大而安全的表达系统,用于无LPS蛋白质的蛋白质生产.
结论:
- 开发的pKS81等离子体和S. aureus LAC9宿主系统为无LPS重组蛋白的诱导和分泌表达提供了一个有效的平台.
- 该系统可促进高产量生产和简单的净化,使其对生物医学研究和工业应用具有高度价值.
- 该系统克服了先前的瓶,实现了高产量的高产量,可诱导在格拉姆阳性细菌中的表达.
