用CMAH基因导向整合构建的CHO细胞系对重组蛋白表达的作用
Xiang-Xiang Cao1, Jing-Jia Yuan2, Zhi-Yuan Bai2
1International Joint Research Laboratory for Recombinant Pharmaceutical Protein Expression System of Henan, Xinxiang Medical University, Xinxiang 453003, Henan, China; Sanquan College of Xinxiang Medical University, Xinxiang 453003, Henan, China.
International journal of biological macromolecules
|December 30, 2024
概括
使用CRISPR/Cas9针对中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞中的CMAH基因位点增强了重组治疗蛋白 (RTP) 生产稳定性. 这种方法提供了更一致的表达和较低的异质性为蛋白质,如红色素 (EPO).
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 细胞生物学 细胞生物学
- 基因工程是一种基因工程.
背景情况:
- 中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞对于重组治疗蛋白 (RTP) 生产至关重要.
- 目前使用随机转基因整合的方法导致长期表达不稳定.
- 在CHO细胞中的cytidine monophosphate N-acetylneuraminic acid hydroxylase (CMAH) 基因产生一种可以引起人类免疫反应的分子,其在转基因整合中的作用尚不清楚.
研究的目的:
- 研究将转基因集成到CMAH基因位点对CHO细胞RTP表达稳定性的影响.
- 利用CRISPR/Cas9基因编辑,在CMAH创建一个有针对性的集成站点.
- 为了比较从CMAH站点集成与随机集成中RTP表达的稳定性和异质性.
主要方法:
- 使用CRISPR/Cas9基因编辑来准CHO细胞中的CMAH基因.
- 红色素 (EPO) 和增强绿色光蛋白 (EGFP) 的重组表达载体被整合到CMAH位点中.
- 分析了表达水平,异质性和N-糖化模式,并与随机集成的转基因进行了比较.
主要成果:
- 与随机整合相比,在CMAH现场集成EPO和EGFP导致表达水平显著更稳定.
- CMAH位点集成导致细胞克隆细胞中蛋白质表达的异质性较低.
- 通过CMAH位点集成产生的EPO观察到N-糖化样本的变化.
结论:
- 针对性地集成到CHO细胞中的CMAH基因位点中,提高了重组治疗性蛋白质表达的稳定性.
- 这一战略提供了一种有前途的方法,以提高CHO细胞系生物制药生产的一致性和质量.
- CMAH位点整合可能会影响翻译后的修改,如N-糖化,影响蛋白质功能.
