通过apt-qPCR检测高灵敏度的Staphylococcus aureusα-hemolysin蛋白 (Hla或α-毒素) 的检测

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 免疫学 免疫学 免疫学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 黄金葡萄球菌的α毒素 (α毒素) 是一种形成毛孔的毒素 (PFT),与细菌致病性有关.
• 编码α-毒素的hla基因存在于大多数金黄色菌株中,其表达与毒性相关.
• 现有的α-毒素检测方法存在局限性,需要改进的诊断工具.

研究的目的:

• 开发和验证一种改进的基于三明治胺抗体的测定方法,用于检测α-毒素.
• 建立一种敏感和特定的方法来量化人类血清样本中的α-毒素水平.

主要方法:

• 产生和净化针对变质复合α-毒素的特定小鼠多克隆抗体.
• 开发一种基于aptamer的α-toxin检测系统.
• 作为捕获剂的抗体和作为检测器的aptamer在aptamer定量PCR (apta-qPCR) 试验中的集成.

主要成果:

• 在apta-qPCR试验中,在300至0.5 ng/mL的范围内,在未稀释的人体血清样本中成功检测出α-毒素.
• 该试验显示高特异性,没有观察到交叉反应性.
• 证实了优异的试验可重复性,试验内和试验间的变化系数 (CV) 分别为0.84%和1.06%.

结论:

• 开发的aptamer-antibody三明治试验提供了一种强大而敏感的方法来检测α-toxin.
• 这种apt-qPCR方法将aptamers和抗体的特异性与qPCR的灵敏度相结合.
• 该试验有可能在诊断实验室中用于在各种临床环境中检测α-毒素.