使用不可逆转的索尔塔酶介导结合,对素H4进行半合成的协议,并进行特定部位的修改
Yihang Xiao1, Kun Zou2, Mingxuan Wu3
1Department of Chemistry, School of Science, Westlake University, Hangzhou, Zhejiang Province 310030, China; Institute of Natural Sciences, Westlake Institute for Advanced Study, Hangzhou, Zhejiang Province 310024, China.
STAR protocols
|January 4, 2025
概括
这项研究引入了一种新的方法,用于使用索尔塔酶介导结合 (SML) 进行希斯H4半合成. 这种技术可以制备均的基因组H4蛋白质,包括具有翻译后修饰 (PTM) 的蛋白质,这对于染色体研究至关重要.
科学领域:
- 表观遗传学和分子生物学
- 蛋白质化学和生物化学
背景情况:
- 基因组H4的翻译后修饰 (PTM) 是染色质结构和功能的关键调节者.
- 现有的生产基因组修饰的方法往往很复杂,并产生异质的产品.
- 为了进行详细的机理学研究,需要一种强大的,高效的方法来用PTM合成同质素H4.
研究的目的:
- 介绍一个详细的协议,用于半合成的组素H4使用sortase介导结合 (SML).
- 为了能够制备同质的本H4蛋白质,包括那些具有特定的翻译后修饰 (PTMs) 的蛋白质.
- 为研究基因组PTMs在染色质调节中的功能性作用提供基础.
主要方法:
- 基因素H4 (H4R40C(1-42) 的N端片段的固体相合成).
- 复合表达和净化C端片段的素H4 (H4{41}-102) 和排序酶 (eSrt{2A-9)).
- 准备烯胺和执行索尔塔酶介导结合 (SML) 用于基因素H4组合.
主要成果:
- 通过SML成功建立了一个通过SML半合成希斯H4的综合性协议.
- 该方法允许对片段进行受控和高效的结合,以形成全长的基因素H4.
- 该协议可以适应将各种翻译后修改 (PTM) 纳入组 histone H4.
结论:
- 排序酶介导结合 (SML) 提供了一种强大的方法来半合成同质的素H4.
- 该协议有助于制备具有特定PTM的基因组H4变体,这对于表观遗传学研究至关重要.
- 描述的方法提供了一个有价值的工具,以促进对染色质调节和基因素功能的理解.
