使用LC-MS/MS分析从重组尖峰和ACE2糖蛋白中特异性N-和O-糖的特征
Ju Hwan Song1,2, Sangeun Jang1, Jin-Woong Choi1
1Digital Omics Research Center, Korea Basic Science Institute, Ochang 28119, Republic of Korea.
International journal of molecular sciences
|January 8, 2025
概括
这项研究详细介绍了SARS-CoV-2尖端蛋白和ACE2的糖化过程,揭示了关键部位和糖类型. 这些发现为开发有效的COVID-19疫苗和治疗方法提供了洞察力.
科学领域:
- 生物化学和分子生物学
- 病毒学 病毒学
- 免疫学 免疫学 免疫学
背景情况:
- 由SARS-CoV-2引起的COVID-19大流行,需要了解病毒蛋白结构和功能.
- 尖端 (S) 蛋白和ACE2受体的糖化对SARS-CoV-2的进入和免疫性产生了重大影响.
- 详细的特定部位的葡萄糖蛋白质组分析对于治疗和疫苗开发至关重要.
研究的目的:
- 描述复合SARS-CoV-2尖端蛋白域 (RBD,S2) 和ACE2.的N-和O-糖化概况.
- 识别和量化特定位点的糖化模式和相关的翻译后修饰 (PTM).
- 为了解糖化如何影响蛋白质功能和免疫性提供见解,以改善COVID-19对策.
主要方法:
- 重组受体结合域 (RBD) 和尖端蛋白的S2亚单元,以及ACE2在Expi293F和植物细胞中表达.
- 使用了高分辨率质谱仪 (轨道轨道日食三基) 与集成葡萄糖蛋白质组分析仪 (I-GPA) 相结合.
- 鉴定了特定站点的N-和O-糖,并分析了糖类型和PTM.
主要成果:
- 来自RBD的148个N-和28个O-糖,来自S2的71个N-糖和来自ACE2的139个N-糖.
- 在RBD和ACE2上确定了新的甘氨酸PTM,包括曼诺-6-酸盐 (M6P) 和O-乙化.
- 在Asn331 (RBD),Asn1098 (S2) 和Asn103 (ACE2) 确定了主要的N-甘化位点,在RBD/ACE2上有复杂的甘,在S2上有高曼诺斯.
结论:
- 建立了关键SARS-CoV-2蛋白质的详细的糖蛋白组图.
- 特定位点的糖化模式显著影响蛋白质的结构和功能.
- 这些发现为设计更有效的COVID-19疫苗和基于抗体的疗法提供了基础.
