对大脑微血管的隔离和对小鼠和人类RNA光的可视化方案
Olivia M Osborne1, Oandy Naranjo1, Silvia Torices1
1University of Miami Miller School of Medicine, Department of Biochemistry and Molecular Biology, Miami, FL, USA.
STAR protocols
|January 8, 2025
概括
这项研究详细介绍了一种分离大脑微容器和使用RNAscope杂交技术可视化信使RNA (mRNA) 的协议. 这种方法可以在小鼠和人类脑组织样本中准确量化mRNA.
科学领域:
- 神经科学是一个神经科学.
- 分子生物学分子生物学
- 遗传学 是一个遗传学.
背景情况:
- 大脑中的微血管在其功能中起着至关重要的作用,并与各种神经疾病有关.
- 在这些微容器中精确量化信使RNA (mRNA) 对于理解基因表达模式和疾病机制至关重要.
- 现有的微血管隔离方法和随后的RNA分析可能是复杂和耗时的.
研究的目的:
- 提出一种标准化的协议,用于从脑组织中分离微血管.
- 通过RNAscope in situ杂交,使孤立的微容器内的mRNA可视化和量化.
- 提供一种适用于老鼠和人类新鲜和快速冷的大脑样本的方法.
主要方法:
- 从新鲜或快速冷的大脑组织 (老鼠和人类) 中分离微血管.
- 样品的准备,包括固定,以获得最佳的RNA保存.
- RNAscope杂交技术用于mRNA的现场可视化和定量化.
主要成果:
- 描述了微血管隔离和RNAscope集成的详细协议.
- 该协议有助于在脑微容器中量化mRNA.
- 该方法已在小鼠模型中得到验证,并且可以适应人类大脑样本.
结论:
- 该协议提供了一种强大的方法来研究大脑微血管中的基因表达.
- 它有助于更深入地了解神经健康和疾病中的微血管生物学.
- 对人类样本的适应性使其对翻译研究具有价值.
