用无血清单细胞激活试验评估细胞新鲜度对铁素检测的影响
Katsuhiko Hayashi1, Mizuki Sano2, Toshie Kanayasu-Toyoda3
1Division of Microbiology, National Institute of Health Sciences, Kawasaki, Kanagawa, Japan.
PloS one
|January 8, 2025
概括
这项研究表明,两天的外周血液单核细胞 (PBMC) 适合无血清单细胞激活试验 (MAT) 检测火原体. 开发的方法增强了灵敏度,允许使用储存的血液样本进行热素测试.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 分析化学 分析化学
背景情况:
- 原体,包括脂多糖 (LPS),可以在进入血液中时引起严重的冲击症状.
- 单细胞激活试验 (MAT) 是一种用于检测火素的体外试验,通常使用人体单细胞并测量干白素-6 (IL-6) 产量.
- 优化细胞获取和培养介质对于提高MAT敏感性和广泛采用至关重要.
研究的目的:
- 评估细胞新鲜度对单细胞激活试验 (MAT) 敏感性的影响.
- 开发一种使用LPS结合蛋白 (LBP) 的无血清MAT试验,用于增强激素检测.
- 为了确定存储的外周血液单核细胞 (PBMCs) 在 pyrogen 测试中的可用性.
主要方法:
- 从2天和5天的全血样本中分离了周围血液单核细胞 (PBMC).
- 开发了一种无血清的MAT,结合了LPS结合蛋白 (LBP) 来增强脂多糖 (LPS) 检测.
- 使用ELISA量化interleukin-6 (IL-6) 水平,以应对具有和没有LBP的不同LPS度 (0.0014.096 EU/mL).
主要成果:
- 对LPS的检测极限 (LOD) 在LBP存在时 (0.0010.008 EU/mL) 与没有LBP (0.512 EU/mL) 相比显著较低,表明灵敏度增加了38.6倍.
- 使用无血清MAT与LBP,5天的PBMC显示LOD为0.0160.064EU/mL,与2天的PBMC相比,敏感度增加了3.1倍.
- 随着储存时间的推移,PBMC的敏感性逐渐下降,而不是急剧下降.
结论:
- 两天的PBMC足够新鲜,可以用于无血清MAT测定.
- 与LBP一起开发的无血清MAT显著提高了 pyrogen检测灵敏度.
- 储存的血液样本,特别是2天的PBMC,可以在MAT中可靠地使用,这有助于更广泛地应用热素检测.
