使用大肠杆菌 (Escherichia coli) 来表达和净化Mycobacterium tuberculosis F420依赖葡萄糖-6-酸盐脱酶的酶
Adewale Victor Aderemi1, Matthew Snee2, Richard B Tunnicliffe3
1Manchester Institute of Biotechnology, Department of Chemistry, University of Manchester, 131 Princess St, Manchester, M1 7DN, United Kingdom; Osun State University, Osogbo, Osun State, Nigeria.
研究人员开发了一种更快,更安全,更便宜的方法,使用大肠杆菌生产功能性Mtb-FGD1. 这一突破使F420依赖酶在工业和环境排毒中的新应用成为可能.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 包括Mycobacterium tuberculosis的Mtb-FGD1在内的F420依赖酶是关键的药物标和工业生物催化剂.
- 目前在Mycobacterium smegmatis中生产Mtb-FGD1是缓慢的,昂贵的,并使用非GRAS生物体,阻碍了大规模应用.
- Mtb-FGD1使用葡萄糖6酸盐 (G6P) 作为F420减少的电子捐赠者.
研究的目的:
- 为功能Mtb-FGD1.1开发一个更高效,更具成本效益和更安全的表达系统.
- 为了证明表达的Mtb-FGD1在生物催化和排毒应用中的实用性.
主要方法:
- 为Mtb-FGD1表达而设计的大肠杆菌,使用适应寒冷的GroEL/ES伴侣.
- 净化了复合的Mtb-FGD1酶.
- 通过测量F420降解与G6P,并与Tfu-FNO结合F420H2再氧化来测量检测的酶活性.
主要成果:
- 在大肠杆菌中获得了大约70mg/L的功能Mtb-FGD1的产量.
- 证实了该酶使用G6P降低F420的能力.
- 在F420H2再氧化中与Tfu-FNO成功合,使污染物的潜在排毒成为可能.
结论:
- 开发的大肠杆菌表达系统为Mtb-FGD1生产提供了优质的替代方案.
- 有效生产的功能性Mtb-FGD1具有作为工业生物催化剂的巨大潜力.
- 该酶在合反应中的活性为生物修复和 Malachite 绿,picrate 和 aflatoxin 等污染物的排毒打开了道路.
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