基于EGFP/RFP的FRET传感器用于肉毒神经毒素A的生物活性检测和方法验证
Yu Wang1, Bingbing Zhang2, Ruohui Zhang2
1Joint Drug Development and Innovation Centre for Neurological Disorders of Lanzhou University-China National Biotec Group-Lanzhou Biotechnology Development Co., School of Pharmacy, Lanzhou University, Lanzhou, Gansu, 730000, PR China; MOE Frontiers Science Center for Rare Isotopes, Lanzhou University, Lanzhou, Gansu, 730000, PR China.
Analytica chimica acta
|January 12, 2025
概括
基于FRET的新型传感器提供了一种快速方便的方法来检测甲型肉毒神经毒素 (BoNT/A) 活性,克服了临床和生产用途的传统测试的局限性.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 毒理学 毒理学 毒理学
背景情况:
- 甲型玻尿酸神经毒素 (BoNT/A) 是一种强大的神经毒素,具有重要的医疗和化品应用.
- 目前的检测方法,如小鼠生物试验 (MBA) 是耗时的,昂贵的,和道德问题.
- 目前用于BoNT/A活动的FRET传感器面临的挑战包括实验复杂性和光毒性.
研究的目的:
- 开发和验证基于FRET的新型分子和细胞传感器,用于检测BoNT/A内酶活性.
- 与现有技术相比,建立一个更有效,更可靠的BoNT/A检测方法.
主要方法:
- 使用EGFP-SNAP25(141-206)-DsRED.开发基于FRET的分子传感器.
- 使用稳定表达EGFP-SNAP25-tDimer2.2的Neuro-2a细胞系构建基于细胞的传感器.
- 对两种传感器类型进行BoNT/A活动分析的方法验证.
主要成果:
- 分子传感器表现出高灵敏度 (4U) 的线性范围为7.8125U,以及良好的恢复 (96.8122.7%) 和精度 (<20%).
- 基于细胞的传感器实现了高灵敏度 (100 pM),线性范围为3.125 nM50 nM,可接受的恢复率为86.3117.2%).
结论:
- 开发的基于FRET的分子和细胞传感器为BoNT/A生物活动测量提供了方便和快速的方法.
- 这些传感器适用于评估临床样本中的BoNT/A,环境监测和制药生产质量控制.
