一种基于盘的检测系统,用于检测内源性:N-glycanase/NGLY1活动,使用基于光的探头
Hiroto Hirayama1, Tadashi Suzuki1
1Glycometabolic Biochemistry Laboratory, RIKEN Cluster for Pioneering Research, Riken, 2-1 Hirosawa, Wako Saitama, Japan.
Bio-protocol
|January 13, 2025
概括
一种新的基于光共振能量转移 (FRET) 的测定方法精确地测量了原始生物样本中的细胞质:N-糖酶 (PNGase/NGLY1) 活性,克服了用于诊断的蛋白酶干扰.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 酶学 是一种酶学.
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 细胞质:N-糖酶 (PNGase/NGLY1) 是糖蛋白质质量控制中的关键酶.
- 目前对PNGase/NGLY1的测定受阻于原始样品中的内源蛋白酶活性.
- 之前开发了一种标记为5-carboxyfluorescein的糖化循环- (5FAM-GCP) 试验,该试验提供了对蛋白质分解的抗性.
研究的目的:
- 为测量内源PNGase/NGLY1活性开发一种新的,强大的测定方法.
- 克服以前测定的局限性,特别是原始生物来源中的蛋白酶降解.
- 为了实现可靠的诊断和跨生物体活动测量.
主要方法:
- 开发一种基于光共振能量转移 (FRET) 的糖基化循环 (fGCP) 探针.
- 在基于微板的测试系统中使用fGCP探针.
- 在各种生物样本中测量PNGase/NGLY1活性,包括细胞系,组织和患者衍生细胞,使用光板阅读器.
主要成果:
- fGCP试验成功检测了各种酶源中的内源PNGase/NGLY1活性.
- 该试验显示了对内源性蛋白酶干扰的耐药性.
- 实现了基于微板的PNGase/NGLY1活性实时测量.
结论:
- 新的fGCP试验提供了一种简单可靠的方法来测量PNGase/NGLY1活性.
- 这种测定有助于准确诊断疾病,并使不同生物体进行比较研究.
- fGCP试验适用于分析各种生物矩阵中的PNGase/NGLY1活性.
更多相关视频
19:23Use of Recombinant Fusion Proteins in a Fluorescent Protease Assay Platform and Their In-gel Renaturation
Published on: January 16, 2019
9.2K
07:37Click-Chemistry Based Fluorometric Assay for Apolipoprotein N-acyltransferase from Enzyme Characterization to High-Throughput Screening
Published on: May 13, 2020
1.9K
