在iPSC衍生的iNeurons中对轴突运输进行实时成像的协议
Dan Dou1, Erika L F Holzbaur1, C Alexander Boecker2
1Department of Physiology, Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania, Philadelphia, PA 19104, USA; Neuroscience Graduate Group, University of Pennsylvania Perelman School of Medicine, Philadelphia, PA 19104, USA.
STAR protocols
|January 13, 2025
概括
这项研究详细介绍了人类诱导多能干细胞 (iPSC) 衍生神经元 (iNeurons) 中轴突运输的实时成像的新协议. 这种方法有助于理解神经退行性疾病.
科学领域:
- 神经科学是一个神经科学.
- 干细胞生物学 干细胞生物学
- 遗传学 是一个遗传学.
背景情况:
- 人类诱导的多能干细胞 (iPSC) 衍生神经元 (iNeurons) 为研究神经退行性疾病提供了一个强大的模型.
- 了解轴突运输对于神经退行性疾病研究至关重要.
- 目前研究i神经元中轴突运输的现有方法存在局限性.
研究的目的:
- 介绍一个详细的协议,以实时成像的轴突运输在质性iPSC衍生的神经元 (iNeurons).
- 使研究人员能够使用iPSC模型研究神经退行性疾病机制.
- 提供适用于各种iPSC系的可复制方法,包括具有疾病相关突变的iPSC系.
主要方法:
- 使用PiggyBac介导的神经原蛋白2 (NGN2) 输送,将iPSCs分化为i神经元.
- 用于实时成像的iNeurons的培养和转染.
- 采集和分析时间间隔图像,以评估轴突运输动态.
主要成果:
- 建立了一个强大的协议,用于对iNeurons中轴突运输的实时成像.
- 该协议针对KOLF2.1J iPSCs进行了优化,但可以适应其他iPSC线路.
- 该协议的成功应用允许在与疾病相关的iPSC模型中详细观察运输.
结论:
- 开发的协议促进了iNeurons中轴突运输的实时成像,推动了神经退行性疾病研究.
- 这种方法为研究神经系统疾病背后的细胞机制提供了有价值的工具.
- 该协议的适应性提高了它在不同研究环境和iPSC模型中的实用性.
