微板光谱法用于区域选择性脂酶查,使用有结构的甘油三和尼基酸作为探针

科学领域:

• 生物催化剂和酶技术
• 脂酶的工程和应用.

背景情况:

• 脂酶区域选择性对于生产结构性脂质和其他工业应用至关重要.
• 评估脂酶区域选择性的现有方法往往是低效的或缺乏高通量能力.

研究的目的:

• 开发一种连续的,高通量检测法,用于选脂酶在三糖醇 (TAG) 上的sn-1,3和sn-2位置的区域选择性.
• 描述脂酶的区域选择性,包括对特定酶的新发现.

主要方法:

• 一个连续测定测量TAG衍生物的初级 (sn-1,3) 和二级 (sn-2) 位置的特定水解速率.
• 该试验使用了从特定TAG基质 (sn-POP和sn-OPO) 中释放的基酸的吸收比率.
• 使用已知的脂酶和in silico分析 (分子对接) 进行验证,以了解区域选择性的结构决定因素.

主要成果:

• 该试验成功地区分了sn-1,3和sn-2区域特异性脂酶.
• 来自Candida rugosa的重组脂酶4 (rCRLip4) 意外地显示出显著的sn-2区域选择性,超过了rCALA.
• 结构分析提供了关于CRLip4和CRLip1.1之间的区域选择性差异的见解.

结论:

• 开发的连续测定是一种多功能工具,用于选各种脂酶区域选择性 (sn-1,3,sn-2或非区域选择性).
• 这种测定具有优化生物催化过程的巨大潜力,特别是在结构性脂质的生产中.
• 发现rCRLip4的sn-2区域选择性为酶工程和工业应用开辟了新的途径.