阿尔卑斯山山羊中PRNP的CRISPR/Cas9编辑

科学领域:

• 兽医遗传学 兽医遗传学
• 神经退行性疾病研究研究
• 基因编辑技术的技术

背景情况:

• 子疾病,如那些影响山羊的疾病,源于错误折叠的细胞子蛋白 (PrP).
• 完全没有PrP^c会对子疾病产生抵抗力.
• 准PRNP基因提供了一种预防病的策略.

研究的目的:

• 使用CRISPR/Cas9.9对PRNP基因的淘汰 (KO) 基因进行工程设计.
• 为了建立一个PRNP-KO阿尔卑斯山山羊系列,用于未来的病耐药性研究.
• 调查PRNP新型变体对它们在病中的潜在作用.

主要方法:

• 用CRISPR/Cas9核核糖蛋白和单链供体寡核酸来进行基因编辑.
• 在电穿孔之前,基因组编辑器被注射到阿尔卑斯山山羊胚胎/卵细胞中.
• 经过编辑的胚胎被转移到受体山羊身上,并对后代进行PRNP基因修改分析.

主要成果:

• 从10个后代中成功生成了具有PRNP基因组编辑等位基因的8只创始人阿尔卑斯山山羊.
• 在创始人中发现了五种不同的KO突变和一种新的PRNP^del6变异.
• 只有编辑过的等位基因的三个创始人在表型上是正常的,其中一个雄性PRNP-KO动物被选择用于进一步的繁殖.

结论:

• 通过CRISPR/Cas9技术,可以有效地产生PRNP淘汰的阿尔卑斯山山羊.
• 已建立的PRNP-KO线为研究病耐药性的研究提供了一个有价值的模型.
• 进一步的研究将探索PRNP^del6变种以及遗传背景对PRNP KO表型的影响.